抽象的
許多極高危急性白血病患兒仍需要異基因造血幹細胞移植（HSCT）。HLA 半相合家庭供體是那些沒有 HLA 匹配供體的人的合適選擇。在這裡，我們展示了一種新型 HLA 半相合 HSCT (haplo-HSCT) 策略的結果，該策略採用胸腺衍生的 CD4 + CD25 + FoxP3 +過繼免疫療法調節性 T 細胞 (Tregs) 和常規 T 細胞 (Tcons) 於 2017 年 1 月至 2021 年 7 月期間在 20 名患有高危白血病的兒童中進行。中位年齡為 14.5 歲（範圍 4-21 歲），15 人患有急性淋巴細胞白血病，5 人患有急性髓性白血病。預處理方案包括全身照射（TBI）、噻替派、氟達拉濱、環磷酰胺。移植物含有大劑量的 CD34+ 細胞（平均 12.4 × 10 6 /Kg）、Tregs (2 × 10 6 /Kg) 和 Tcons (0.5–1 × 10 6/公斤）。所有患者均實現了初級、持續的全供體植入。只有一名患者復發 (5%)。非複發死亡率的發生率為 15%（3/20 患者）。五/20 名患者發生≥2 級急性移植物抗宿主病（aGvHD）。它解決了 4 名活著且無病的人；1 名患者發展為慢性 GvHD (cGvHD)。GRFS 的概率為 60 ± 0.5%（95% CI：2.1-4.2）（圖 6），CRFS 為 79 ± 0.9%（95% CI：3.2-4.9），因為 16/20 患者存活且無白血病. 中位隨訪時間為 2.1 年（範圍 0.5 個月至 5.1 年）。這種創新方法與兒科患者 HSCT 策略的非常有希望的結果相關。
介紹
患有急性白血病（AL），特別是急性淋巴細胞白血病（ALL）的兒科患者的預後已大大改善。5 年無事件生存 (EFS) 率現已超過 80% [ 1 ]，這歸功於預測治療反應的更深入的遺傳和分子特徵、風險適應療法的設計和新的化療方案 [2 ]。與歷史對照相比， Blinatumomab、inotuzumab ozogamicin (InO) 和CD19嵌合抗原受體 T 細胞 ( tisagenlecleucel ) 改善了 ALL 兒童的反應率和生存[ 3、4、5、6 ]。儘管採用了這種新方法，許多患者可能仍需要 HSCT 來維持疾病緩解 [ 7]. 事實上，在特定時間點，監測微小殘留病灶可預測復發風險，因此可指導首次完全緩解時進行 HSCT的指徵[ 8、9、10 ] 。
對替代供體的需求一直推動著 HLA 半相合 HSCT (haplo-HSCT)。最初基於大劑量 CD34+ 幹細胞，haplo-HSCT 方案隨著時間的推移進行了修改，以改善免疫重建並降低非複發死亡率 (NRM)。它包括 T 細胞耗竭、α/β T 和 CD19+ B 細胞耗竭，以及在 T 細胞充足的單倍體 HSCT 中移植後高劑量環磷酰胺 (PT/Cy ) [ 11、12、13 ]]. 儘管採用了所有這些方法，但目前復發仍然是高危 (HR) 白血病兒科患者單倍體造血幹細胞移植失敗的主要原因。實際上，haplo-HSCT 的主要兒科方案的累積復發率約為 24%。在佩魯賈 BMT 中心的成年 AL 患者中，採用 Treg/Tcon 過繼免疫療法且無移植後藥理學免疫抑制的單倍體 HSCT 復發率極低 (4%)，慢性 GvHD/無復發生存率 (CRFS) 為 75% ) [ 14]. 從 2017 年至今，佩魯賈兒科腫瘤-血液科已對 20 名兒科患者採用成人方案。這種移植方案基於高劑量清髓性預處理方案，包括全身照射 (TBI) 和化學療法、T 細胞耗盡的造血 CD34+ 幹細胞和添加 200 萬/公斤體重的調節性 T 細胞，然後是 1百萬/千克體重的常規 T 細胞。Tregs 能夠在單倍體環境中控制其他致命的 aGvHD，同時不抑制移植物抗白血病效應。在這裡，我們展示了這種移植策略在非常 HR 患者中的結果。
主題和方法
haplo-HSCT 協議經翁布里亞地區醫院倫理委員會批准，並在 ClinicalTrials.gov 中註冊為協議 ID 02/14 和 NCT03977103。沒有匹配的相關或無關供體的 HR ALL 或 AML 患者符合條件。在入組前，患者的父母根據赫爾辛基宣言提供了書面知情同意書。2017 年 1 月至 2021 年 7 月期間，招募了 20 名 HR AL 兒科患者（15 名 ALL，5 名 AML，中位年齡 14.5 歲；範圍 4-21）。CR1移植6例，CR2移植9例，≥CR3移植5例。表 1和表 2報告了每個患者的人口統計學、疾病特徵、細胞遺傳學和分子標記、移植狀態和供體特徵。5 例患者出現髓外病變（表 1 ). 從診斷到移植的中位時間為 9.5 個月（範圍 3-40），CR2 和 CR3 患者從復發到移植的中位時間為 3 個月（範圍 3-15）。
捐助者
供體是具有一種與患者相同的 HLA 單倍型的健康家庭成員（表 1）。在 13/20 個案例中選擇了母親，主要是因為她們可用，而且據報導母親作為供體的存活率更高 [ 15 , 16 ]。10/20 的患者可以使用自然殺傷同種異體反應供體 [ 17 ]。
移植程序
預處理方案包括 TBI 和化療。在 16 名患者中，TBI 按照以下時間表進行：1.5 Gy × 2/天，持續 4.5 天，總計 13.5 Gy；在 4 名中位年齡為 4 歲的患者中，TBI 按照以下時間表進行：3.3 Gy/天，持續 3 天，總計：9.9 Gy。由於中位年齡為 4 歲的患者在照射前需要鎮靜，因此 TBI 的時間表不同，因此總輻射劑量也不同，以減少放療次數。化療包括噻替派（5 mg/kg，連續 2 天）、氟達拉濱（40 mg/m 2，連續 4 天）、環磷酰胺（15 mg/kg/天，連續 2 天）。所有患者在第 −4 天接受 T-regs（2 × 10 6 /Kg），第 −1 天接受 T-cons（0.5 × 10 6 /Kg，10 名患者；1 × 10 6/Kg 其他 10) 和大劑量陽性選擇的 CD34+ 細胞（平均 12.4 × 10 6 /Kg，範圍 7.1–24.5）在第 0 天（圖 1），西羅莫司，一種選擇性 mTOR 抑製劑（2 mg/m 2從幾天-8 至 -4）。每天監測西羅莫司血液水平，以便在 -4 天（Treg 輸注）達到治療範圍（5-10 ng/ml 之間）並在第 0 天（CD34+ 細胞輸注）實現清除。在第 -2 天，利妥昔單抗 (200 mg/mq) 作為移植後淋巴組織增生性疾病 (PTLD) 的預防給藥。沒有給予移植後藥物 GvHD 預防。
圖 1：移植模式。
嫁接加工
在施用粒細胞集落刺激因子 (G-CSF) 以動員造血祖細胞之前，收集供體 Treg 和 Tcon。在 Ficoll-Hypaque 梯度上將 CD3+ T 細胞與白細胞去除術產物分離。總共向 10 名患者輸注0.5 × 10 6 /kg 的 Tcon，10 名患者輸注 1 × 10 6 /kg。根據 Treg 的純度確定 CD3+ T 細胞的劑量。之後，將白細胞去除術產品中的 CD8+/CD19+ 細胞耗盡，然後對 CD25+ 細胞進行陽性選擇，然後使用 CliniMACS 設備（Miltenyi Biotec GmbH，Bergisch Gladbach，德國）通過免疫磁化程序選擇 CD4+CD25+ Tregs。平均而言，Treg 產品包含 84 ± 4.9% 的 CD4+CD25+FOXP3+ 細胞和 25 ± 6.7% 的 CD127+ 細胞。總共 2 × 10 6/kg Tregs 被注入每位患者。G-CSF 給藥後，從 2-3 個白細胞分離術中收集供體 CD34+ 細胞並進行陽性免疫選擇 (CliniMACS) [ 18、19 ]。
端點和定義
主要終點是 NRM 和復發的累積發生率（根據骨髓形態學、流式細胞術、細胞遺傳學、熒光原位雜交和聚合酶鏈反應定義為疾病復發）。次要終點是：完全供體移植、≥2 級 aGvHD 和 cGvHD 的累積發生率、GvHD/無復發生存率（GRFS）和 CRFS 的概率。通過 T 細胞計數和對病原體的特異性反應監測免疫重建。其他地方描述了克隆的方法和評估 [ 18 ]。
統計數據
累積發生率估計值（通過灰色檢驗評估）用於 aGvHD 和復發以及 NRM，它們是競爭風險。Kaplan-Meier 方法評估了 GRFS 和 CRFS。
結果
植入
所有患者均實現了初級、持續的全供體型植入，在中位 14 天（範圍 10–17）時達到 ANC > 0.5 × 10 9 /l。血小板計數 >20 × 10 9 /l的中位時間為 17 天（範圍 10-35）。
調理方案相關毒性
根據不良事件通用術語標準，毒性為輕度（1 級）或中度（2 級）。沒有患者發生超過 II 級的口腔粘膜炎。
移植物高清
5/20 名患者發展為 ≥ II 級 aGvHD，其中 1/5 發展為 III/IV 級，並在移植後第 35 天死亡。累積發生率為 33% (±2%)。中位發病時間為 19 天（範圍 8-80 天）（圖 2). 患者接受高劑量類固醇和早期體外光分離療法治療，每週進行 3 次手術，中位時間為 6 週，逐漸減少到每週 2 次，最後是每週 1 次。在 7 天后患者接受西羅莫司 (2/5)、環孢菌素 (1/5) 和麥考酚酸 (1/5) 治療後，光分離療法伴隨類固醇療法逐漸減量。英夫利昔單抗給予 2/5 患者，Ruxolitinib 給予 3/5 和 Begelomab，一種 CD26 單克隆抗體，與抗胸腺細胞球蛋白一起給予 1/5。免疫抑制治療的中位持續時間為 6.5 個月（範圍 6-9）。四名患者還活著並暫停了免疫抑制治療。一名發展為 cGvHD 的患者目前正在解除免疫抑制治療並處於疾病緩解期（圖 2）。
圖 2：移植物抗宿主病。
免疫重建
外周血 CD3+ 細胞在移植後 30 天和 100 天分別達到 319/µl（範圍 119-2217/µl）和 727/µl（範圍 136-1656）的中值，CD4+ 細胞達到 149/µl 的中值（範圍 71-481/µl) 和 235/µl（範圍 67-659） 在移植後 30 天和 100 天，CD8+ 細胞分別達到 151/µl（範圍 18-1465/µl）和 408/分別在移植後 30 天和 100 天進行微升（範圍 69–1288）（圖 3）。CD19+ 和 CD20+ 細胞的中位數分別達到 56/µl（範圍 0–101）和 188/µl（範圍 38–248）。
圖 3：移植後的 T 細胞恢復。
針對HHV-6、煙曲霉、白色念珠菌、CMV、腺病毒、人類皰疹病毒6（HHV6）、單純皰疹病毒、水痘帶狀皰疹病毒和弓形蟲等機會性病原體的特異性CD4+和CD8+淋巴細胞很快出現（圖 4）。
圖 4：病原體特異性 T 細胞反應。
感染性並發症
6/20 名患者 (30%) 在移植後 53 天（範圍：42-84）中位出現 EBV 病毒血症（中位病毒載量：12,500 拷貝/毫升；範圍 2817-400,000）。2/6 患者的 PTLD 用 4 劑利妥昔單抗 (375 mg/m 2 )成功治療。隨後從 2017 年 6 月起，使用利妥昔單抗（200 mg/m 2) 在第 −2 天開始，沒有發生更多的 PTLD 病例。在所有 20 名患者中觀察到移植後 HHV-6 再激活（中位病毒載量 14,121 拷貝/毫升；範圍 705-284,794 拷貝/毫升），中位時間為 9 天（範圍：6-15）。10 例 (50%) 的器官受累（1 例腦炎、2 例肝炎、1 例肺炎、4 例胃腸炎和 2 例多器官受累並伴有肺炎和腸炎）每天兩次使用 90 mg/Kg 膦甲酸成功治療。兩名移植前 HCV RNA 陽性的患者在移植後 68 天和 25 天出現 HCV 肝炎和肝功能衰竭，組織學證據表明肝炎與 HCV 病毒血症顯著增加相關（分別為 3,519,000 UI/ml 和 6,545,000 UI/ml）。直接作用的抗病毒藥物完全解決了肝功能衰竭和病毒血症的陰性問題。儘管 CMV 感染的發生率為 35%（5/20 患者），但沒有患者死於 CMV。2/20 名患者發生侵襲性真菌感染 (10%)。6/20 (30%) 患者出現革蘭氏陰性膿毒症，4/6 患者出現多重耐藥性，2/20 (10%) 患者出現革蘭氏陽性膿毒症。一名患者在移植後第 +110 天感染了 SARS-CoV-2，並在沒有嚴重急性呼吸系統綜合症和/或明顯後遺症的情況下康復。開始使用瑞德西韋進行抗病毒治療，同時進行靜脈內免疫球蛋白和 3 次超免疫血漿輸注。SARS-CoV-2 陽性在鼻咽拭子 PCR 中持續存在超過 2 個月，而患者沒有出現呼吸道症狀或發燒。72 天后，患者呈陰性，SARS-Cov-2 抗體呈強陽性 (78.6 AU/ml)。2/20 名患者發生侵襲性真菌感染 (10%)。6/20 (30%) 患者出現革蘭氏陰性膿毒症，4/6 患者出現多重耐藥性，2/20 (10%) 患者出現革蘭氏陽性膿毒症。一名患者在移植後第 +110 天感染了 SARS-CoV-2，並在沒有嚴重急性呼吸系統綜合症和/或明顯後遺症的情況下康復。開始使用瑞德西韋進行抗病毒治療，同時進行靜脈內免疫球蛋白和 3 次超免疫血漿輸注。SARS-CoV-2 陽性在鼻咽拭子 PCR 中持續存在超過 2 個月，而患者沒有出現呼吸道症狀或發燒。72 天后，患者呈陰性，SARS-Cov-2 抗體呈強陽性 (78.6 AU/ml)。2/20 名患者發生侵襲性真菌感染 (10%)。6/20 (30%) 患者出現革蘭氏陰性膿毒症，4/6 患者出現多重耐藥性，2/20 (10%) 患者出現革蘭氏陽性膿毒症。一名患者在移植後第 +110 天感染了 SARS-CoV-2，並在沒有嚴重急性呼吸系統綜合症和/或明顯後遺症的情況下康復。開始使用瑞德西韋進行抗病毒治療，同時進行靜脈內免疫球蛋白和 3 次超免疫血漿輸注。SARS-CoV-2 陽性在鼻咽拭子 PCR 中持續存在超過 2 個月，而患者沒有出現呼吸道症狀或發燒。72 天后，患者呈陰性，SARS-Cov-2 抗體呈強陽性 (78.6 AU/ml)。6/20 (30%) 患者出現革蘭氏陰性膿毒症，4/6 患者出現多重耐藥性，2/20 (10%) 患者出現革蘭氏陽性膿毒症。一名患者在移植後第 +110 天感染了 SARS-CoV-2，並在沒有嚴重急性呼吸系統綜合症和/或明顯後遺症的情況下康復。開始使用瑞德西韋進行抗病毒治療，同時進行靜脈內免疫球蛋白和 3 次超免疫血漿輸注。SARS-CoV-2 陽性在鼻咽拭子 PCR 中持續存在超過 2 個月，而患者沒有出現呼吸道症狀或發燒。72 天后，患者呈陰性，SARS-Cov-2 抗體呈強陽性 (78.6 AU/ml)。6/20 (30%) 患者出現革蘭氏陰性膿毒症，4/6 患者出現多重耐藥性，2/20 (10%) 患者出現革蘭氏陽性膿毒症。一名患者在移植後第 +110 天感染了 SARS-CoV-2，並在沒有嚴重急性呼吸系統綜合症和/或明顯後遺症的情況下康復。開始使用瑞德西韋進行抗病毒治療，同時進行靜脈內免疫球蛋白和 3 次超免疫血漿輸注。SARS-CoV-2 陽性在鼻咽拭子 PCR 中持續存在超過 2 個月，而患者沒有出現呼吸道症狀或發燒。72 天后，患者呈陰性，SARS-Cov-2 抗體呈強陽性 (78.6 AU/ml)。開始使用瑞德西韋進行抗病毒治療，同時進行靜脈內免疫球蛋白和 3 次超免疫血漿輸注。SARS-CoV-2 陽性在鼻咽拭子 PCR 中持續存在超過 2 個月，而患者沒有出現呼吸道症狀或發燒。72 天后，患者呈陰性，SARS-Cov-2 抗體呈強陽性 (78.6 AU/ml)。開始使用瑞德西韋進行抗病毒治療，同時進行靜脈內免疫球蛋白和 3 次超免疫血漿輸注。SARS-CoV-2 陽性在鼻咽拭子 PCR 中持續存在超過 2 個月，而患者沒有出現呼吸道症狀或發燒。72 天后，患者呈陰性，SARS-Cov-2 抗體呈強陽性 (78.6 AU/ml)。
NRM 和死因
NRM 累積發生率為 15% (3/20)（圖 5）。原因是：侵襲性曲霉病（1 名患者）、IV 級 aGVHD [ 1 ]、急性呼吸窘迫綜合徵 [ 1 ]。
圖 5：非複發死亡率 (NRM) 和復發。
復發和 GRFS
在中位隨訪 2.1 年（範圍 0.5 個月至 5.1 年）時，1 名接受 CR3 移植的患者復發（圖 5）。他接受了來自不同的半相合家族供體的第二次移植，但在移植後 7 個月死於復發。在中位隨訪 2.1 年時，GRFS 的概率為 60 ± 0.5%（95% CI：2.1-4.2）（圖 6），CRFS 為 79 ± 0.9%（95% CI：3.2-4.9）為 16 /20 名患者存活且無白血病（圖7）。
圖 6：CRFS。
圖 7：GRFS。
討論
這項研究表明，在一小群兒科患者中，使用大劑量 CD34+ 造血幹細胞和 Treg/Tcon 過繼免疫療法的單倍體 HSCT 根除了大多數白血病，實現了 80% 的無白血病存活率和 75% 的無白血病/cGvHD存活率。根據細胞遺傳學、分子標誌物和移植時的疾病階段，所有患者均受極 HR 白血病的影響。令人鼓舞的是，有 5/20 的髓外疾病患者存活且狀況良好，完全緩解
這些有希望的結果需要在更大的研究中得到證實，與類似 HR 患者的幾種替代單倍體 HSCT 方案的結果相比具有優勢。80 名 AL 兒童的 α/β T 和 CD19+ B 細胞耗竭與 24% CI 的複發相關。伯泰納等人。[ 20 ] 比較了使用該方案（98 名患者）、匹配的無關供體（127 名患者）和不匹配的供體（118 名患者）進行移植後的結果。α/β T 和 CD19+ B 細胞耗竭方案成為無白血病生存的中間方案，與其他方法相比，NRM 的 CI 更低，GFRS 更好。在接受 CD3/CD19 清除的同種異體移植物後，46 名兒科患者在 2 年時的總體復發概率為 38% [ 21 ]。
我們的結果還表明，如果與兒童的未經處理的移植相比，可以更好地防止複發。事實上，約翰霍普金斯醫院報告了 52% 的複發累積發生率 (CI)，II-IV 級 aGvHD 的 33% CI，cGVHD 的 24% CI 和接受 T-的 HR AL 兒童的 3 年 EFS 為 32%用 PT/Cy [ 22 ] 填充 HSCT。AIEOP-GITMO 回顧性多中心研究表明，在 33 名患有 HR 血液惡性腫瘤的兒科患者中，T 細胞充滿 PT/Cy HSCT 在 1 年隨訪時達到了 24% 的複發 CI 和 72% 的 OS [11 ]]. 可能影響 T 細胞耗盡移植復發率的一個因素是缺乏已知可預防白血病復發的效應 T 細胞。相反，在未經處理的移植中，白血病復發率高的原因可能是移植後藥理學免疫抑制，例如 PT/Cy，因為它抑制了針對白血病的同種異體反應性淋巴細胞。
在沒有任何移植後藥理學免疫抑制的情況下，本研究中 20 人中有 1 人的 4 年復發率表明我們的單倍體 HSCT 方案發揮了強大的抗白血病作用 (GvL)，這也發生在髓外部位。正如 FORUM 試驗 [ 23 ] 和匹配的 T 耗盡 HSCT [ 24 ]所證明的那樣，不是單劑量的 TBI 不僅降低了毒性，而且還促進了更好的 GvL 效應。由於 CI 顯著低於歷史對照（0.05 對 0.21；P = 5.03）[ 18、19 ]，因此即使使用該方案接受 HSCT 的成年 AL 患者也可以避免 GvHD [ 18 ] 和移植後白血病復發。
在臨床前模型中深入研究了維持 GvL 效應和 GvHD 預防的機制 [ 25 ]。Tregs 和 Tcons 發揮強烈 GvL 效應的證據是從移植的人淋巴細胞或骨髓白血病的異種小鼠移植模型中獲得的。Tregs 和 Tcons 的輸注拯救了在沒有 GvHD 的情況下存活的小鼠。不同的 Treg 和 Tcon 遷移特性被假設為沒有 GvHD 的 GvL 效應的基礎。Tcons 在皮膚、肝臟和腸道中與 Tregs 共定位，其中 Tcon 抑制可防止 GvHD [ 19 ]。由於 Tcons 比 Tregs 更強烈地表達 CXCR4 骨髓歸巢分子，因此它們單獨歸巢到骨髓，通過同種異體抗原識別發揮強大的 GVL 效應 [ 19 ]。
在本研究中，雖然 aGvHD 的累積發生率為 33%，但仍有 4/5 的患者存活、無白血病、停止免疫抑制治療且無 cGVHD。早期光置換術允許所有患者的類固醇治療很快逐漸減量和暫停 [ 26 ]。這種方案中 aGvHD 的發生率 [ 14、18、19 ]可能首先解釋為我們在不輸注 Tregs 的情況下在不匹配的環境中輸注了其他致死劑量的效應 T細胞。應該強調的是，正如我們之前證明的那樣，在沒有任何藥物 GVHD 預防的情況下，Treg 輸注在很大程度上阻止了輸注 0.5-100 萬 Tcons 的潛在致死性[ 18、19 ]]. 事實上，只有 1 名患者死於 aGVHD。此外，目前的隊列在移植前已經過大量預處理。大多數人接受過多種治療，通常病史不明，並且在診斷時沒有細胞遺傳學或分子標記。其次，通過 CD3+ 和 CD8+ T 細胞反應，HHV-6 再激活可能在 aGvHD [ 27 ]中發揮作用，因為它發生在我們所有患者中，平均發生在移植後第 +9 天，其中 50% 發生非致命性器官受累 [ 28 ]。移植前後細胞因子的釋放，尤其是 IL-6，可能與觸發 HHV6 感染有關 [ 29]. 最後，移植後免疫恢復以及外周血 T 細胞和針對 HHV-6 的病原體特異性 CD4+ 和 CD8+ T 細胞反應的快速增加可能是一把雙刃劍。一方面，它可能負責清除感染和相當好的最終結果，但另一方面，它可能觸發了 HHV6 再激活。為了減少 aGvHD 的發生率，我們修改了我們的移植方案，以在最後十名患者的預處理方案中加入西羅莫司，這是一種 mTOR 抑製劑（-8 至 -4 天 2 mg/m 2 ）。來自不同移植接受者的幾項臨床試驗的證據表明，與環孢菌素不同，它通過將 CD4 + CD25幼稚T 細胞轉化為 CD4促進體內 Treg 細胞擴增 [ 30 ]+ Foxp3 + Tregs [ 31 ]，從而控制引起 GvHD [ 32 ]的效應 T 淋巴細胞的活性。儘管 aGvHD 的發病率在兩個亞組中相似，但由於後一組患者需要較少的免疫抑制治療，因此該疾病似乎不太嚴重。毫無疑問，在就西羅莫司作為預處理方案的一部分的有效性得出任何明確結論之前，需要更大的隊列。
儘管我們觀察到高 aGvHD 率，但儘管進行了免疫抑制治療，CD4+ 和 CD8+ 病原體特異性頻率在移植後第 2/3 個月達到正常水平。儘管 CMV 感染的發生率為 35%，但只有一名患者患上了 CMV 病（肺炎），目前還健在。2020 年大流行初期，一名患者在移植後感染了 SARS-CoV-2，但沒有出現嚴重的急性呼吸系統綜合症和/或明顯的後遺症。由於最初的 Covid 變體與免疫過度反應有關，我們患者的免疫缺陷和 T 細胞很少可能已經預防了嚴重的 Covid-19 疾病 [ 33]. 此外，值得注意的是，只有一名患者發展為 cGvHD（現在他正在停止治療），並且沒有接受免疫抑制治療的患者死於 TRM 或複發。cGVHD 的極低發生率可能與 Treg 輸注有關 [ 34 ]。
這項研究受到相對較小隊列的限制，目前的結果需要在大型系列中得到證實。然而，中位隨訪 4 年的結果令人鼓舞，迄今為止只有 1 例復發。在我們看來，這種採用過繼性 Treg/Tcon 免疫療法的單倍體 HSCT 方案對於 HR 非常高的 AL 兒科患者來說是一個很好的策略。