糖尿病腎病（diabetic kidney disease，DKD）是糖尿病（DM）常見且難治的微血管並發症，其發病過程與血管生成調節因子（ARFs）的異常表達密切相關。幹細胞移植可能是治療 DKD 的一種新策略。本研究旨在探討人羊膜間充質乾細胞（hAMSCs）移植對1型DKD大鼠模型（T1DRM）腎臟微血管病變的影響。
方法：72隻大鼠隨機分為三組，包括正常對照組、DKD組和hAMSCs移植組。T1DRM 是使用大鼠尾靜脈注射鏈脲佐菌素 (STZ) (55 mg/kg) 建立的。hAMSCs 在剖宮產期間從胎盤羊膜中獲得，並在 3 周和 4 週時通過陰莖靜脈移植。在移植後第 6、8 和 12 週，分析了血糖水平、腎功能、腎髒病理改變以及 ARFs mRNA 和蛋白的表達。
結果：在 T1DRM 中，移植到腎臟損傷部位的 hAMSCs 增加了 ARFs 的表達並降低了血糖水平。與DKD組相比，hAMSCs移植組24小時尿蛋白、血清肌酐、尿素和腎損傷分子-1（KIM-1）水平降低。在基底膜增厚程度等腎髒病理方面，hAMSCs移植也沒有DKD組嚴重，從而減輕了腎臟損傷。
結論： hAMSCs移植可能通過增加ARFs在腎臟中的表達和降低血糖水平來改善STZ誘導的慢性腎損傷。
Keywords: DKD, hAMSCs, 腎微血管病, 血管生成調節因子
介紹
糖尿病腎病（DKD）作為糖尿病（DM）的微血管並發症，已成為全球關注的公共衛生問題。1大約 40% 的患者有患 DKD 的風險。2糖尿病是中國終末期腎病（ESRD）的第二大病因，患病率和死亡率不斷上升。3 DKD的發病和進展與血管內皮細胞功能障礙、結構異常和各种血管生成調節因子（ARFs）表達失調密切相關。4 , 5最近的研究發現，改善在 DKD 的演變中起關鍵作用的 ARF 的異常表達可能會減緩疾病的進展。6、7因此，評估 DKD 抗血管生成治療的潛力至關重要。8此外，最近的一項動物研究表明，血管生成是早期 DKD 的潛在治療靶點。5個
幹細胞治療近年來成為治療許多慢性疾病的研究熱點，在糖尿病微血管病變等涉及乾細胞遷移、直接分化、旁分泌和免疫調節等方面取得了可喜的成果。糖尿病腎病的高糖環境使得乾細胞有可能遷移到受損組織並發揮其修復功能。同時，氧化應激可能影響缺氧條件下間充質乾細胞（MSCs）的旁分泌作用。9根據之前的研究，將骨髓間充質乾細胞 (BM-MSCs) 移植到糖尿病小鼠體內可抑制 DKD 炎症和纖維化，同時改善腎小球硬化，10和臍帶間充質乾細胞 (UC-MSCs) 對 DKD 動物模型發揮治療作用，表現為有助於 DKD 進展的慢性炎症減少。11 BM-MSCs 植入通過分泌血管內皮生長因子 (VEGF) 和血小板衍生生長因子 (PDGF) 加速傷口癒合中的血管生成，正如 An 等人 12 發現的那樣，幹細胞移植可能通過分泌 ARF 改善DKD。但乾細胞及其分泌的ARFs對DM腎臟微血管病變的影響鮮有報導。
先前的研究表明，MSCs 可以遷移、增殖和分化成成熟的內皮細胞，並產生多種細胞因子和生長因子，從而誘導血管生成和傷口癒合。12 , 13具體而言，Zhang 等人14發現 uMSC-Exos 的移植可以誘導血管生成和骨癒合，其機制可能涉及缺氧誘導因子-1α (HIF-1α) 和 VEGF 的上調。可從人胎盤中提取的 hAMSCs 因其可及性、高可塑性、低免疫原性和強大的多向分化能力而成為有前途的干細胞。他們尤其沒有道德關懷。15然而，hAMSCs 在如何改善糖尿病腎臟微血管病變的預後中發揮作用，目前尚不清楚。因此，本實驗旨在探討hAMSCs移植對1型DKD大鼠模型（T1DRM）腎臟微血管病變的影響，以及是否與腎臟ARFs表達或血糖水平相關。
材料和方法
hAMSCs 的分離、培養和形態學觀察
所有實驗均經遵義醫科大學倫理與研究委員會批准（批准號：2017-112）。從羊膜供體獲得知情同意。收集孕婦的足月胎盤。他們的血清甲型肝炎、乙型肝炎、人類免疫缺陷病毒 (HIV) 和梅毒螺旋體檢測呈陰性。羊膜在無菌條件下剝離，並放入裝有 D-Hanks 的無菌瓶中。如前所述分離和培養 hAMSC。16 , 17流式細胞術檢測CD44、CD90、CD73、CD105、CD34、CD11b、CD19、CD45、人白細胞抗原DR（HLA-DR）（BioLegend，美國）等相關細胞表面標誌物，鑑定表型。 hAMSC。使用油紅 O、茜素紅和甲苯胺藍染色觀察脂肪、鈣結節和軟骨分化。使用免疫組織化學染色檢測 hAMSC 中的波形蛋白表達。
大鼠模型和 hAMSCs 移植
健康 Sprague-Dawley (SD) 雄性大鼠，3-4 月齡，體重 200±20 g（無特定病原體等級，許可證號-SCXK，重慶；2012-0005）由第三軍醫大學大坪醫院提供。所有動物實驗均經遵義醫學院動物實驗倫理委員會批准（編號：81260118）。大鼠被關在溫度為 20–25℃、相對濕度為 40–70% 的籠子裡。所有大鼠正常餵養，自由飲水和食物。如所述，使用由 STZ（American Sigma，55 mg/kg）誘導的 T1DRM。18 , 1972小時後，連續三天從尾靜脈採血以測量血糖水平。以血糖≥16.65 mmol/L、尿蛋白排泄率≥30 mg/24 h、尿量>前一次的150%、連續三天尿糖陽性為建模標準。72隻大鼠隨機分配至（1）NC組（n=24），腹腔注射等劑量檸檬酸-檸檬酸鈉，移植等量PBS替代hAMSCs；(2) DKD組(n=24)：造模後移植等量PBS替換hAMSCs；(3)MSC組(n=24)：造模後3、4週進行PBS-hAMSCs移植，0.2mL細胞懸液(1×10 7/mL) 使用微量注射器收集。通過陰莖靜脈緩慢注射PBS-hAMSCs（2.0×10 6 個細胞/每個）。每組分為三個亞組：6、8 和 12 週（每組至少六隻大鼠）。補充Western blot分析，第8週造模2次。在每個時間點進行 hAMSC 處理後，收集血液、尿液樣本和腎組織用於進一步分析。所有大鼠均用 7% 水合氯醛麻醉並實施安樂死。所有動物實驗都是完全隨機和盲法的。
組織學分析、免疫組織化學和免疫熒光染色
腎組織標本用10%甲醛和4%多聚甲醛固定16 h後送病理科石蠟包埋切片。進行蘇木精 – 伊紅（H＆E）和高碘酸 – 希夫（PAS）染色以在光學顯微鏡下觀察腎組織的形態學變化。常規脫蠟和水化後，將切片浸泡在檸檬酸鹽緩衝修復液（0.01 M，pH 6.0）中進行免疫組化染色。每個切片加入山羊血清 30 分鐘。針對 Thrombospondin-1 (TSP-1) (Rabbit, 1:300, 18304-1-AP, Proteintech, USA)、VEGF (Rabbit, 1:200, ab32152, Abcam, UK)、酪氨酸激酶受體-2 ( Tie-2)（兔，1:100，bs-1300R，Beijing Bioss）和血管生成素-1 (Ang-1)（兔，1:200, 23302-1-AP, Proteintech, USA)加入4℃冷藏過夜。此後，加入山羊抗小鼠/兔IgG二抗（ZB-2301，ZSGB-Bio，北京）並在恆溫箱中孵育。顯影、脫水、乾燥後，用中性香脂封片。圖像在顯微鏡下拍攝，並使用 Image-Pro Plus 6.0 測量積分光密度 (IOD)。常規脫蠟水化後，每張切片加入山羊血清進行免疫熒光染色。針對 TSP‑1（兔，1:300、18304-1-AP，Proteintech，美國）、VEGF（兔，1:200、ab32152、Abcam、英國）、Tie-2（兔，1:100）的熒光標記一抗, bs-1300R, Beijing Bioss), Ang-1 (Rabbit, 1:200, 23302-1-AP, Proteintech, US), and Anti-human cell nuclei (MAB1281) (Mouse, 1:100, Merck Millipore, USA）加入，置於冰箱4℃過夜。加入熒光二抗（1:800, ZF-0314, ZSGB-Bio, Beijing）。用甘油封片後，立即在熒光顯微鏡（Eclipse Ci-e，尼康，日本）下觀察和拍照。
定量實時 PCR
TRIzol試劑（Solarbio，北京）用於腎臟RNA提取，Nanodrop 1000（Nanodrop，美國）用於檢測RNA純度和濃度。RT-qPCR 按照說明書（Takara Bio，大連）進行。使用了以下引物對：VEGF 正向 5′-CGGAGAGCAACGTCACTATG-3’，反向 5′-GGTCTGCATTCACATCTGCT-3’；Ang-1 正向 5′-CCATGCTGGAGATAGGAACC-3’，反向 5′-TGGATTTCAAGACGGGATGT-3’；Ang-2 正向 5′-TCAACTCTGGCTCAGGA-3’，反向 5′-GGCCTCTTCTCTTCATCATGC-3’；TSP-1 正向 5′-AACAAGAACGCCAAGTGCAA-3’，反向 5′-CAGCCGTCAAGGTCTGTGTC-3’；Tie-2 正向 5′-GGCTGGCCGCTACCTACTAA-3’，反向 5′-TCCGGTGGATGGTGAATATG-3’；β-肌動蛋白正向 5′- GACCTGACCGACTACCTCATG-3’，反向 5′-TCTCCTTGATGTCCCGCAC-3’。進行了 qPCR，並且 2 -ΔΔCT採用相對定量法對結果進行分析。
免疫印跡
從腎組織中提取蛋白質後，使用 BCA 蛋白質測定試劑盒（Thermo Fisher Scientific）測量蛋白質濃度。根據濃度測定結果，上樣並使用蛋白質印跡法進行分析。使用以下一抗：Ang-1（兔，1:1000，Proteintech，中國武漢，23302-1-AP）、VEGF（小鼠，1:3000，Proteintech，中國武漢，66828-1-lg）、TSP -1（小鼠，1:3000，Proteintech，中國武漢，67241-1-lg），β-肌動蛋白（小鼠，1:5000，ABclonal，AC004）和微管蛋白（小鼠，1:50,000，Proteintech，中國武漢， 66031-1-LG）。洗滌後，加入山羊抗小鼠（1:5000，Thermo Fisher Scientific，31,430）和山羊抗兔（1:5000，Thermo Fisher Scientific，31,460）二抗。使用凝膠成像系統檢測信號，
統計分析
使用 Statistics 18.0 軟件進行統計分析。所有數據均以平均值±標準差 (x±s) 表示。單因素方差分析用於比較多個組。當方差齊時，使用最小顯著差異（LSD）。當方差不均勻時，使用Dunnett’s T檢驗進行校正。進行了 Pearson 相關性分析。統計學顯著性設定為α=0.05，ΔP < 0.05，*P <0.01被認為具有統計學意義。
結果
hAMSCs的特徵和鑑定
我們觀察到 hAMSC 是粘附的多形細胞。同時，hAMSCs 表達波形蛋白，一種間充質細胞標記物（圖 1A）。進一步的研究表明，hAMSCs 可以分化為成骨細胞、成軟骨細胞和脂肪細胞（圖 1B）。流式細胞術分析表明，第三代 hAMSCs 高表達 CD44、CD73、CD90 和 CD105，但不表達 CD34、CD11b、CD19、CD45 和 HLA-DR（圖 1C ）。
hAMSCs的形態學、表型特徵和各種誘導分化能力。( A ) hAMSC 呈紡錘形、多邊形和星形。免疫細胞化學染色顯示 hAMSCs 表達波形蛋白，一種間充質細胞標記物。( B ) 染色結果；hAMSCs 分化為成骨細胞、成軟骨細胞和脂肪細胞後 21 天。
注：(a)：茜素紅染色後第21天的骨細胞(100×)；(b)：甲苯胺藍染色後第21天的軟骨細胞(100×)；(c)：油紅 O 染色 (200×) 後第 21 天的脂肪細胞。( C ) FCM 分析表明，第三代 hAMSCs 高表達 CD44、CD73、CD90 和 CD105，但不表達 CD34、CD11b、CD19、CD45 和 HLA-DR。
腎臟 hAMSCs 歸巢能力的評估
MAB1281 被用作示踪劑來探索 hAMSCs 的歸巢能力。免疫熒光染色顯示在將 hAMSCs 注入靜脈後 2、4 和 8 週（建立糖尿病模型後 6、8 和 12 週）呈陽性標記。此外，在腎組織中觀察到陽性 MAB1281 表達。然而，MAB1281 表達（圖 2）在 DKD 和 NC 組中不存在。該結果表明 hAMSCs 可以寄居在 DKD 大鼠腎臟中。
hAMSCs 移植改善了 STZ 誘導的 T1DRM 的腎功能
建立 STZ 誘導的 T1DRM 以探索 hAMSCs 移植對 DKD 的影響。移植後 6、8 和 12 週，動物被處死，並收集標本用於進一步分析（圖 3A）。結果顯示，hAMSCs移植組的血糖水平明顯高於NC組，但低於模型組（圖3B）。此外，移植組24 h尿蛋白水平高於NC組，但低於模型組（表1和圖3C）。與 NC 和 DKD 組相比，移植組血清肌酐 (SCr) 和胱抑素 C (Cys-c) 水平的變化不顯著（圖 3D和F）。然而，hAMSCs治療組的尿素水平高於NC組，但顯著低於DKD組（P <0.05）（表2和表3，圖3E）。此外，除12週組外，移植組KIM-1水平高於NC組，KIM-1水平低於DKD組（P <0.05）（表2和表3，圖3G） . 這些結果表明，hAMSCs 移植減輕了 DM 大鼠的腎損傷。
大鼠治療時間表和流程圖，以及hAMSCs移植後血尿生化指標的變化。( A )大鼠治療第0天至第12周流程圖。( B – G )三隻大鼠血糖、24小時尿蛋白水平、尿素水平、Cys-c、尿液KIM-1水平直方圖團體。
注：與 NC 組相比，Δ P <0.05；與 DKD 組相比，○ P <0.05。
hAMSCs移植減少了腎臟組織中腎臟的病理變化
hAMSCs 移植和 DKD 組之間的比較顯示腎臟重量指數顯著降低（圖 4A）。H&E和PAS染色顯示NC組腎小球、腎小管和間質無明顯異常。但在2個糖尿病模型組均觀察到腎小管肥大、腎小管間質炎性細胞浸潤增多、腎小管基底膜增厚、系膜基質增多等病理變化，而DKD+hAMSCs組病理變化相對減輕（表4，圖 4B和C）。
hAMSCs移植干預STZ誘導的大鼠腎髒病理變化的影響。( A )腎臟/體重：DKD組和MSC組在各時間點的腎臟/體重比均高於NC組( P <0.05)。MSC 組的腎臟/體重比低於 DKD 組。然而，在 6 周和 12 週觀察到統計學顯著性（P <0.05）。( B ) 三組大鼠腎組織H&E染色(×400)：淡藍色箭頭：炎症細胞浸潤；深藍色箭頭：腎小管肥大。( C )三組大鼠腎組織PAS染色(×400)：黑色箭頭：系膜基質增加；紅色箭頭：增厚的管狀基底膜。
注：與 NC 組相比，Δ P <0.05；與 DKD 組相比，○ P <0.05。
hAMSCs干預對各組腎ARFs mRNA和蛋白表達的影響
如圖 5-7所示，hAMSCs 移植促進了血管生長因子的表達。DKD組和MSC組腎組織中TSP-1、VEGF、Ang-1、Ang-2和Tie-2 mRNA表達水平在各時間點均較對照組不同程度上調。與 DKD 組相比，MSC 組在 12 週時 Ang-1 表達水平顯著上調，但在 8 周和 12 週時分別下調 TSP-1 和 VEGF 表達水平。然而，與 DKD 組相比，MSC 組中 VEGF 和 Ang-1 mRNA 水平增加，而 Ang-2 和 Tie-2 mRNA 表達沒有顯著變化（圖5). 免疫組化和熒光顯示，與 NC 組相比，DKD 組和 MSC 組腎組織中 TSP-1、VEGF、Ang-1 和 Tie-2 的表達顯著升高（P <0.05）。MSC組TSP-1表達低於DKD組（P <0.05）。DKD組同一時間點VEGF和Ang-1蛋白表達較高。僅在第 6 周和第 8 週觀察到 VEGF 表達的顯著差異（P <0.05）。Ang-1表達僅在8週時有統計學意義（P <0.05）。然而，DKD 組在 6 周和 8 週時 Tie-2 表達較高，但在 12 週時 DKD 組較低（P <0.05；圖 6). 8週時通過Western blot分析VEGF、Ang-1和TSP-1蛋白表達水平，結果相同（P <0.01）（圖7）。這些結果表明，hAMSCs 移植可以調節 T1DRM 中的血管生成因子水平。
hAMSCs移植改善了大鼠腎臟血管生成因子的mRNA表達。各時間點NC、DKD、MSC組TSP-1、VEGF、Tie-2、Ang-1、Ang-2 mRNA表達水平。
注：與 NC 組相比，Δ P <0.05；與 DKD 組相比，○ P <0.05。
hAMSCs移植改善了大鼠腎臟血管生成因子的蛋白表達。( A – C ) 各時間點NC、DKD、MSC組TSP-1、VEGF、Tie-2、Ang-1蛋白表達水平。
注：與 NC 組相比，Δ P <0.05；與 DKD 組相比，○ P <0.05。
hAMSCs 移植改善了 8 週時 T1DRM 中 VEGF、Ang-1 和 TSP-1 的蛋白表達（通過 WB 分析確定）( A – D )。注：與 NC 組比較，Δ P < 0.05；與 DKD 組相比，* P < 0.01。
相關分析
根據各指標的免疫組化染色結果進行相關性分析。結果顯示，TSP-1 與 24 小時尿蛋白、24 小時尿蛋白與 KIM-1、TSP-1 與 KIM-1、KIM-1 與尿素、VEGF 與 Ang-1、Tie- 2 和 Ang-1，以及 VEGF 和 Tie-2（P <0.05）。此外，Ang-1 和 24 小時尿蛋白、Tie-2 和 24 小時尿蛋白、VEGF 和 24 小時尿蛋白、Tie-2 和 KIM-1、Tie-2 和 TSP-1、VEGF 之間呈負相關和 TSP-1，以及 Ang-1 和 TSP-1 被揭示 ( P <0.05)（圖 8A-H）。這些結果表明糖尿病腎 AF 之間存在正相關和負相關。此外，hAMSCs 調節 AF 的表達，最終改善 DKD。
各指標相關性分析結果。( A ) 24小時尿蛋白與TSP-1、VEGF、Tie-2、Ang-1相關性分析線性圖。( B ) KIM-1與24小時尿蛋白、TSP-1、Urea、Tie-2相關性分析線性圖。( C和D ) TSP-1、Tie-2 和 VEGF 之間的線性相關分析。( E和F ) Ang-1、TSP-1 和 VEGF 之間的線性相關分析。( G和H ) Tie-2、Ang-1 和 VEGF 之間的線性相關分析。
討論
隨著再生醫學的發展，幹細胞治療腎臟疾病成為新的研究熱點。hAMSCs 在未來將是一種可行的新型療法，因為它們具有低免疫原性和多向分化潛能，並且比其他幹細胞更容易獲得，並且沒有任何社會或倫理限制。然而，關於 hAMSCs 對 DKD 中 ARFs 的影響知之甚少。在本研究中，構建了 STZ 誘導的 T1DRM，其中進行了 hAMSCs 移植，以探索其減少糖尿病腎損傷的療效和潛在機制。本研究表明，hAMSCs可歸巢至T1DRM腎臟，有效降低血糖、24小時尿蛋白、KIM-1和尿素水平，改善腎髒病理損傷，減輕微血管病變。
大量研究表明，MSCs可以通過歸巢至受損器官組織來減少器官組織損傷。11 , 20在這項研究中，hAMSCs 在腎臟中的歸巢能力通過使用一種名為 MAB1281 的示踪劑得到證實，如圖 2所示。還觀察到 hAMSCs 的歸巢可以改善腎損傷並改變 T1DRM 中 ARFs 的表達。
腎臟血管生成是對缺血的適應性反應，其中涉及許多 ARF，例如血管生成素 (Angs)、VEGF、Tie-2 和血小板反應蛋白-1 (TSP-1)。大量研究還表明，Ang-1、Ang-2、Tie-2、VEGF、HIF-1α、基質衍生因子-1 (SDF-1)、TSP-1、色素上皮衍生因子 (PEDF) 和其他 ARFs 在 DM 大鼠的腎臟中異常表達。4-8研究組先前進行的實驗表明，給予 Ang-1 腺病毒載體和 L-mimosine（HIF-1α 降解抑製劑）可改善糖尿病腎臟中異常血管生成因子的表達。21在本研究中，hAMSCs 上調 Ang-1/Ang-2/Tie-2 和 VEGF 的表達，同時下調 TSP-1 的表達，提示 hAMSCs 移植可以調節 DKD 中血管生成因子的異常表達，從而一定程度上。
Ang/Tie-2 系統在調節血管生成中起重要作用。22 Ang-1 具有穩定血管、促進血管成熟、減少血管滲漏、抗內皮細胞凋亡和炎症等生物學功能，23 而 Ang-2 是 Ang-1 的天然競爭性拮抗劑，是啟動血管重塑。它主要在活躍或修復的血管內皮重塑中表達。22 , 24研究人員發現，Ang-1/Ang-2比值的降低，以及Ang/Tie通路的激活，與DKD的病理變化密切相關。25–27在我們的研究中觀察到尿蛋白排泄量明顯下降；此外，Ang-1和Ang-2的表達在每個時間點均上調，Tie-2的表達在第6周和第8週上調，Ang-1/Ang-2的比值在第6周和第8週增加。 T1DRM 中的 hAMSCs 移植。一項研究表明，將 BM-MSCs 移植到糖尿病小鼠傷口後，胰島素樣生長因子 (IGF) 和 Ang-2 高表達，促進內皮細胞增殖和血管生成。28這一發現與我們的研究一致；hAMSCs移植可增加MSC組Ang-2的表達。此外，我們的研究還證實 Ang-1 與 24 小時尿蛋白、尿 KIM-1 和血尿素呈負相關，表明 hAMSCs 移植可以部分糾正 DKD 中 Ang/Tie-2 的異常表達，並且 Ang- 1 海拔高度可以增強新血管的成熟和穩定性。
先前的研究發現，高水平的 VEGF 可能導致異常的血管形成、巨噬細胞激活，甚至系膜擴張。其高度抑制的表達可以減少腎小球肥大、基底膜增厚和蛋白尿排泄。29然而，隨著病情的發展，VEGF 的水平可能會降低，從而導致內皮細胞死亡和毛細血管變薄。30 Ang-2 被證明在沒有 VEGF 的情況下促進血管萎縮。31此外，VEGF可通過PI3K/Akt信號通路促進內皮一氧化氮合酶（eNOS）磷酸化，一方面通過刺激內皮細胞釋放一氧化氮維持腎小球內皮細胞功能，另一方面可同時增加血管通透性和尿蛋白排泄。32 , 33最重要的是，適當水平的VEGF可能通過在疾病的某個階段促進新血管的成熟和穩定而產生積極的結果。研究人員將BM-MSCs來源的外泌體移植到腎缺血再灌注損傷大鼠模型中，發現外泌體組VEGF和CD31表達上調，腎血管密度增加，促進血管新生。34這一發現與本研究中 MSC 組 VEGF 上調的發現一致。然而，VEGF mRNA表達低於DKD組，這可能是由於多種生長因子和細胞因子的異常表達，包括TGF-β1和HIF-1，以及腎臟基因和蛋白質的差異表達。35
血小板反應蛋白 -1 (TSP-1) 首先從人類血小板中分離出來，是第一個被發現的內源性血管生成抑製劑。一些研究人員提出TSP-1或其衍生物直接抑制腫瘤血管生成。36在本研究中，相應地，MSC 組的 TSP-1 表達低於 DKD 組。相關性分析還顯示，24小時尿蛋白與TSP-1呈正相關，與VEGF、Tie-2、Ang-1呈負相關。TSP-1與Tie-2、VEGF、Ang-1呈負相關。Ang-1與VEGF和Tie-2之間存在正相關。總之，這些結果表明糖尿病腎臟中的 ARFs 相互作用，導致腎功能障礙。此外，hAMSCs 移植後 ARFs 的改變與 DKD 的改善有關。
結論
本研究表明，hAMSCs 移植療法可以改善 DM 大鼠的糖尿病腎病。潛在的機制可能涉及腎臟相關血管生成因子表達的改變和血糖水平的降低。因此，我們的研究結果可能為延緩 DKD 進展提供新的治療策略。